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纖維素酶(CL)測(cè)定試劑盒 微量法

2024/11/14 8:58:01  作者:索萊寶


纖維素酶(CL)測(cè)定試劑盒  微量法

操作步驟:

一、樣品測(cè)定的準(zhǔn)備:

1、細(xì)菌或細(xì)胞:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲冰浴破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率 20%,超聲 3S 秒,間隔 10S,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、組織:稱取約 0.1g 組織加入 1mL 提取液,冰浴中勻漿。8000g ,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

二、加樣表和測(cè)定步驟:試劑名稱(μL) 對(duì)照管 測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)管試劑一 50 50 - 試劑二 200 200 - 雙蒸水 50 50 - 樣本 50 - 煮沸的樣本 50 - 混勻,40℃準(zhǔn)確水浴 30min,取出后立即放入沸水中煮沸 15min,得糖化液 混勻,540nm 處蒸餾水調(diào)零,測(cè)定吸光值 A,樣品管計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:540nm 處蒸餾水調(diào)零,讀標(biāo)準(zhǔn)管吸光值 A。以濃度(y)為縱坐標(biāo),吸光度 A(x)為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

 

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纖維素酶(CL)測(cè)定試劑盒  微量法

CL 活力計(jì)算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔA 帶入公式中(x)計(jì)算樣品濃度 y(mg/mL)。 1、按照蛋白濃度計(jì)算單位的定義:每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。 CL 活力(U /mg prot)=1000×y×V 反總÷(V 樣×Cpr)÷T=233×y÷Cpr 2、按樣本鮮重計(jì)算單位的定義:每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。 CL 活力(U/g 鮮重)=1000×y×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T =233×y÷W 3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。 CL 活力(U/10 4 cell)=1000×y×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T =0.467×y 1000:1mg/mL=1000ug/mL;V 反總:反應(yīng)體系總體積,0.35mL; V 樣:加入樣本體積, 0.05 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,30 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度, mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬(wàn)。

纖維素酶(CL)測(cè)定試劑盒  微量法

提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;試劑一:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;試劑二:液體 10mL×1 瓶,4℃保存;試劑三:液體 13mL×1 瓶,4℃保存;標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1 支,4℃保存,含 10mg 無(wú)水葡萄糖(干燥失重<0.2%),臨用前加入 1ml 蒸餾水溶解,配制成 10mg/ml 葡萄糖溶液備用,4℃可保存 1 周,或者用飽和苯甲酸溶液溶解,可保存更長(zhǎng)時(shí)間。

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