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纖維素酶(CL)測定試劑盒 微量法

2024/11/14 8:58:01  作者:索萊寶


纖維素酶(CL)測定試劑盒  微量法

操作步驟:

一、樣品測定的準備:

1、細菌或細胞:收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲冰浴破碎細菌或細胞(功率 20%,超聲 3S 秒,間隔 10S,重復 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

2、組織:稱取約 0.1g 組織加入 1mL 提取液,冰浴中勻漿。8000g ,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

二、加樣表和測定步驟:試劑名稱(μL) 對照管 測定管 標準管試劑一 50 50 - 試劑二 200 200 - 雙蒸水 50 50 - 樣本 50 - 煮沸的樣本 50 - 混勻,40℃準確水浴 30min,取出后立即放入沸水中煮沸 15min,得糖化液 混勻,540nm 處蒸餾水調(diào)零,測定吸光值 A,樣品管計算ΔA=A 測定管-A 對照管。標準曲線的建立:540nm 處蒸餾水調(diào)零,讀標準管吸光值 A。以濃度(y)為縱坐標,吸光度 A(x)為橫坐標建立標準曲線。

 

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纖維素酶(CL)測定試劑盒  微量法

CL 活力計算:根據(jù)標準曲線,將ΔA 帶入公式中(x)計算樣品濃度 y(mg/mL)。 1、按照蛋白濃度計算單位的定義:每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。 CL 活力(U /mg prot)=1000×y×V 反總÷(V 樣×Cpr)÷T=233×y÷Cpr 2、按樣本鮮重計算單位的定義:每 g 組織在反應體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。 CL 活力(U/g 鮮重)=1000×y×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T =233×y÷W 3、按細菌或細胞密度計算單位的定義:每1萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。 CL 活力(U/10 4 cell)=1000×y×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T =0.467×y 1000:1mg/mL=1000ug/mL;V 反總:反應體系總體積,0.35mL; V 樣:加入樣本體積, 0.05 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,30 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度, mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細菌或細胞總數(shù),500 萬。

纖維素酶(CL)測定試劑盒  微量法

提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;試劑一:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;試劑二:液體 10mL×1 瓶,4℃保存;試劑三:液體 13mL×1 瓶,4℃保存;標準品:粉劑×1 支,4℃保存,含 10mg 無水葡萄糖(干燥失重<0.2%),臨用前加入 1ml 蒸餾水溶解,配制成 10mg/ml 葡萄糖溶液備用,4℃可保存 1 周,或者用飽和苯甲酸溶液溶解,可保存更長時間。

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