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4、 血清(漿)或液體樣本:直接檢測。若溶液渾濁則離心后取上清進行測定。
二、測定步驟
1、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 360nm,分光光度計用蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表(在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中依次加入下列試劑):
將上述試劑分別加入微量石英比色皿/96 孔 UV 板中,迅速吹打混勻,分別測定 360nm 處 第 10s 的
吸光值,記為 A 測定管 1、A 空白管 1;然后置于 37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中準(zhǔn)確反應(yīng) 2h,測定 360nm 處
吸光值,記為 A 測定管 2、A 空白管 2,計算 ΔA 測定=A 測定管 1-A 測定管 2,ΔA 空白= A 空白管 1-A
空白管 2。ΔA=ΔA 測定-ΔA 空白。空白管只需測 1-2 次。
三、MAO 活力的計算
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下:
1、按樣本蛋白質(zhì)濃度計算
酶活定義:37℃,pH7.6 條件下,每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1nmol 底物的酶量定義為一個酶活單位。
MAO 活性(U/mg prot)= ΔA÷?÷d ×V 反總×10
9
÷(V 樣×Cpr)÷T=57.08×ΔA÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算
酶活定義:37℃,pH7.6 條件下,每 mg 組織每分鐘消耗 1nmol 底物定義的酶量為一個酶活單位。
MAO 活性(U /g 質(zhì)量)= ΔA÷?÷d ×V 反總×10
9
÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T=57.08×ΔA÷W
3、按細菌/細胞數(shù)量計算
酶活定義:37℃,pH7.6 條件下,每 10
4
細菌/細胞每分鐘消耗 1nmol 底物的酶量定義為一個酶活單位。
MAO 活性(U /10
4
cell)= ΔA÷?÷d ×V 反總×10
9
÷(V 樣÷V 樣總×細胞數(shù)量)÷T=57.08×ΔA÷細胞數(shù)量
4、 按照樣本體積計算
酶活定義:37℃,pH7.6 條件下,每 mL 血清或液體樣本每分鐘消耗 1nmol 底物的酶量為一個酶活單位。
MAO 活性(U /mL)=ΔA÷?÷d ×V 反總×10
9
÷V 樣÷T= 57.08×ΔA
ε:底物摩爾消光系數(shù):1460L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V 反總:反應(yīng)總體積,0.0002L;V 樣:加入
樣本體積,0.02mL,V 樣總:提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時
間,120min;10
9
:單位換算系數(shù),1mol=10
9
nmol。
b.用 96 孔 UV 板測定的計算公式如下:
1、按樣本蛋白質(zhì)濃度計算
酶活定義:37℃,pH7.6 條件下,每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1nmol 底物的酶量定義為一個酶活單位。
MAO 活性(U /mg prot)= ΔA÷?÷d ×V 反總×10
9
÷(V 樣×Cpr)÷T= 95.13×ΔA÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算
酶活定義:37℃,pH7.6 條件下,每 g 組織每分鐘消耗 1nmol 底物的酶量定義為一個酶活單位。
MAO 活性(U /g 質(zhì)量)= ΔA÷?÷d ×V 反總×10
9
÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T= 95.13×ΔA÷W
3、按細菌/細胞數(shù)量計算
酶活定義:37℃,pH7.6 條件下,每 10
4
細菌/細胞每分鐘消耗 1nmol 底物的酶量定義為一個酶活單位。
MAO 活性(U /10
4
cell)= ΔA÷?÷d ×V 反總×10
9
÷(V 樣÷V 樣總×細胞數(shù)量)÷T= 95.13×ΔA÷細胞數(shù)量